單純皰疹病毒(Herpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。從體外診斷試劑注冊視角,一起來看看什么是HSV。
引言:單純皰疹病毒(Herpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。從體外診斷試劑注冊視角,一起來看看什么是HSV。
一、單純皰疹病毒結(jié)構(gòu)
單純皰疹病毒(Herpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。
HSV屬于人類皰疹病毒科α 病毒亞科,為線性雙鏈DNA 病毒,有HSV-1和HSV-2兩種亞型。HSV病毒顆粒呈球形,由包膜,間層,核衣殼和核心構(gòu)成。包膜為類脂雙層膜,表面上有許多突起,含8種病毒糖蛋白(gB, gC, gD ,gE, gF, gG, gH, gI和gJ);核衣殼為162個殼粒組成的對稱的二十面體;核心為病毒DNA分子及DNA蛋白;在包膜及衣殼間為間層,包含病毒編碼蛋白質(zhì)和復(fù)制啟動相關(guān)的酶,覆蓋在衣殼周圍。
二、單純皰疹病毒感染特征
HSV主要通過接觸感染,感染可表現(xiàn)為溶細胞裂解和潛伏感染,其在上皮細胞進行裂解復(fù)制,在感覺神經(jīng)元中則進入潛伏期,受到外界刺激時,病毒重新激活引起臨床癥狀,潛伏病毒還可以通過激活的方式重新進入復(fù)制周期(Lei, Wang et al. 2020),并回到外周組織導(dǎo)致感染復(fù)發(fā)。HSV-1主要引起面部及腰以上皮膚黏膜病變,主要潛伏在三叉神經(jīng)節(jié);HSV-2主要引起生殖器及腰以下皮膚粘膜病變,主要潛伏在骶神經(jīng)節(jié)。這兩種病毒引起的疾病并沒有絕對的界限,比如HSV-1可引起的生殖器皰疹,HSV-2也可引發(fā)口腔及周圍感染。
三、單純皰疹病毒核酸檢測產(chǎn)品批準情況
臨床可根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)進行診斷,而非典型病例可以借助病毒分離培養(yǎng),抗體檢測,抗原檢測和核酸檢測等手段。其中病毒分離培養(yǎng)被廣泛當(dāng)作是金標準,但是由于細胞培養(yǎng)周期較長,程序較復(fù)雜,在臨床檢驗工作中應(yīng)用受到限制;抗體檢測是臨床上常用來檢測HSV感染的手段,病原體特異性IgM抗體常提示早期感染,特異性IgG抗體在原發(fā)性感染和再次感染時都可檢出,且存在時間較長;抗原檢測操作簡便,但是對于低滴度樣本的敏感性差;而采用熒光探針聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time PCR)或其他分子生物學(xué)方法核酸檢測技術(shù),檢測待檢標本中的HSV DNA,是目前檢測速度最快且敏感性最高的方法,可以從少量的標本中檢測有無HSV DNA存在。
目前我國境內(nèi)已批準多家單純皰疹病毒1型和2型檢測試劑盒,均采用熒光探針PCR方法,檢測靶標為HSV DNA,檢測樣本類型主要為男性尿道拭子,女性宮頸拭子, 皰疹液等。臨床試驗主要通過與已上市同類產(chǎn)品進行對比研究,驗證申報產(chǎn)品的臨床性能可以滿足相關(guān)要求,可用于單純皰疹病毒感染的輔助診斷。
FDA已批準單純皰疹病毒1型和2型檢測試劑盒檢測靶標為HSV DNA或mRNA,檢測樣本類型包括皮膚粘膜損傷,口腔部位損傷,生殖器損傷,腦脊液等。其中在2014年FDA批準SIMPLEXA HSV 1&2 DIRECT用于懷疑中樞神經(jīng)系統(tǒng)HSV感染患者的腦脊液樣本的檢測。境外臨床試驗主要通過與金標準病毒培養(yǎng)鑒定比較,或與測序比較,評價產(chǎn)品臨床性能,確認產(chǎn)品是否可用于具有相關(guān)癥狀的患者。
四、對單純皰疹病毒核酸檢測產(chǎn)品的思考
對于產(chǎn)品適用人群的考慮:單純皰疹大多呈局部皮膚黏膜的皰疹糜爛性損害,全身癥狀一般較輕,但初發(fā)性皰疹往往全身癥狀較為明顯,如發(fā)熱,乏力,淋巴結(jié)觸痛等,HSV在各年齡階層人群普遍易感,女性患病率比男性高,兒童營養(yǎng)不良或各種原因引起的免疫力低下也容易受到感染。臨床試驗應(yīng)納入具有相關(guān)臨床癥狀的人群,且入組人群應(yīng)有一定的代表性。
對于產(chǎn)品適用樣本類型的考慮:單純皰疹病毒感染可發(fā)生在多個部位,如口腔皰疹,皮膚皰疹,眼皰疹,生殖器皰疹,皰疹性腦炎,全身散播性皰疹感染,新生兒皰疹等。其起始感染部位是由患者感染病毒的途徑?jīng)Q定,而不是病毒的固有屬性,因此患者感染部位具有多樣性和復(fù)雜性,樣本之間具有差異性,申請人應(yīng)在產(chǎn)品設(shè)計階段需將產(chǎn)品檢測的樣本類型納入考慮,設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗進行驗證。
對于產(chǎn)品對比方法的考慮:如有已上市體外診斷試劑注冊同類產(chǎn)品,應(yīng)考慮預(yù)期用途,檢測靶標,樣本類型,試劑性能等方面選擇合適的已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑驗證產(chǎn)品的臨床性能。對于不同樣本類型,如無已上市同類產(chǎn)品,可考慮使用病毒培養(yǎng)鑒定方法和測序方法作為對比方法,評價產(chǎn)品性能是否可以滿足臨床需求。